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IF/IHC背景太高?正常驴血清来助力

发布者:kok体验官网 科技    发布时间:2020-11-25     
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       想必各位实验达人对于免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)应该都比较熟悉了,在做免疫组化(IHC)或是免疫荧光(IF)实验过程中,高背景是我们经常遇见的问题,有的时候尽管我们进行了封闭操作,背景依旧居高不下。想当年我也曾经就被免疫荧光背景问题带来的恐惧深深支配过,别人做的免疫荧光的结果是这样的:

 

免疫荧光

 

      我按照同样的步骤做的免疫荧光,只是没有染色DAPI,结果是这样的:

 

IF实验

 

      我的细胞你在哪?(是不是上帝在我眼前遮住了脸,忘了掀开)

 

      直到某天我在kok体验官网 官网上浏览到关于IF实验产生背景的原因及降低背景的常用方法:

   

       IF降低背景

 

       高背景是免疫荧光常见的问题,解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液,降低抗体浓度,增加洗涤次数,洗涤至少三次,每次五分钟,推荐洗涤液为 PBS+0.05% Tween。

 

      我们实验室之前大多数都是使用BSA进行封闭,用正常血清代替BSA进行封闭倒是第一次听说,血清真的有如此奇效,我迫不及待的赶紧去尝试了一番,荧光背景确实显著降低了。

 

       什么封闭血清(Blocking Serum=Normal Serum)?

 

      封闭血清是将饲养的非免疫的一切正常小动物取血,随后不用抗凝剂,凝血机制,血团收拢,溶解的浅黄色液体。历经独特处理工艺后的血清,非常适在各种免疫学实验中用以封闭解决, 例如:IHC、IF/ICC、ELISA等。

   

       血清作为封闭剂的原理:

 

      强烈建议在PBS中稀释至5%(v / v)的正常血清作为封闭剂,以减少免疫反应中非特异性,保守序列和/或Fc受体结合的背景。用稀释的正常血清与标记抗体来自同一宿主,可获得最佳结果,作为添加一级抗体之前的单独孵育步骤。

 

       用血清进行封闭效果好吗?

 

      封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭,可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点,另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点,阻断抗体与样品中的Fc受体结合,从而降低背景,减少假阳性。对于适用多抗的实验,选择二抗种属来源的正常血清是封闭处理的金标准。

 

       封闭血清如何使用?

 

      推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在组织切片或者细胞涂片上,37℃度孵育10-30min(或者室温1h),清除血清,不用洗涤,滴加适当比例稀释的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃过夜。

通过上面对封闭血清的介绍,您是不是有一种想立刻动手试一试的冲动呢? 心动不如行动,快来动手试一试吧,看看小艾给您介绍的降低背景小技巧对您的实验有没有帮助,相信您也可以做出漂亮的图片!

 

       封闭血清推荐:

 

产品名称 货号 规格
Normal Donkey Serum(驴) 017-000-121 10 ml
Normal Alpaca Serum(羊驼) 028-000-121 10 ml
Normal Bovine Serum(牛) 001-000-121 10 ml
Normal Cat Serum(猫) 002-000-120 5 ml
Normal Chicken Serum(鸡) 003-000-120 5 ml
Normal Dog Serum(狗) 004-000-120 5 ml
Normal Goat Serum(山羊) 005-000-121 10 ml
Normal Syrian Hamster Serum(叙利亚仓鼠) 007-000-120 5 ml
Normal Horse Serum(马) 008-000-121 10 ml
Normal Human Serum(人) 009-000-121 10 ml
Normal Mouse Serum(小鼠) 5 ml
Normal Rabbit Serum(兔) 5 ml
Normal Rat Serum(大鼠) 5 ml
Normal Sheep Serum(绵羊) 10 ml
Normal Swine Serum(猪) 10 ml

 

      看到这儿,您心动了吗?马上联系小艾吧!

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      作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。kok体验官网 科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-kok体验官网 生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

      kok体验官网 科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

 

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